رواية فيروس كورونا (2019-nCoV) نووي مجموعة الكشف عن الحمض (الفلورسنت RT-PCR)

【مقصود استخدم】

العدة هي TaqMan مسبار الفلورسنت في الوقت الحقيقي PCR للكشف عن الجينات ORF1ab، n نوعيًا حمض 2019-nCoV في مسحة من الحلق ، بلغم في المرضى الذين يشتبه في ظهور أعراض الالتهاب الرئوي والتكتلات

نتائج الاختبار هي للإشارة السريرية فقط و لا يمكن تعتبر المعيار الوحيد للتشخيص الإكلينيكي موصى به لإجراء تحليل واضح فيما يتعلق بالأعراض السريرية والنتائج المعملية الأخرى

المشغلين يجب لديهم خبرة في التدريب المهني في تضخيم الجينات أو اختبار طرق البيولوجيا الجزيئية ، ولديهم المؤهلات ذات الصلة للعمليات المختبرية. المختبر يجب لديها احتياطات سلامة بيولوجية وإجراءات وقائية معقولة

【 مبدأ الاختبار 】

في هذه المجموعة ، تم تصميم البادئات والمجسات للمناطق المحفوظة والمحددة من ORF1ab ، n لـ 2019-nCoV ، على التوالي. الفلورية PCR يستخدم للكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي بعد النواة تنقية العينة الحمضية RNA.

هذا تستخدم مجموعة الاختبار الفلورية في الوقت الحقيقي PCR التكنولوجيا. خلال PCR التضخيم ، والمجس يرتبط بالقالب ، والنهاية 5' مجموعة مراسل التحقيق مشقوق بواسطة Taq إنزيم (5 '→ 3' نشاط نوكلياز خارجي) ، وبالتالي الابتعاد عن مجموعة التبريد لتوليد إشارة فلورية. يتم رسم منحنى التضخيم في الوقت الفعلي تلقائيًا استنادًا إلى إشارة التألق المكتشفة ، ويتم حساب قيمة العينة ct ( عدد الدورات التي تمت تجربتها عندما تصل إشارة التألق في كل أنبوب رد إلى الحد المستقر). FAM و VIC و تكساس الأحمر يتم الاستفادة منها لتمييز ORF1ab الجين ، ن تحقيقات الجينات في التفاعل محلول. باستخدام اختبار واحد ، الكشف النوعي عن الجينين المذكورين أعلاه من 2019-nCoV يمكن أداؤها في وقت واحد.

إلى لتجنب النتيجة السلبية الخاطئة ، يتم تزويد المجموعة برقابة داخلية (IC) ، والتي تم تمييزها بـ Cy5 مجموعة الفلورسنت التي يمكن تستخدم لمراقبة إجراء الاستخراج والتفاعل المحلول

【 المكونات الرئيسية 】

ملحوظة ¹ : العديد من المكونات المختلفة لا يمكن يكون تبادل.

ملحوظة ² : ملف طقم اختبار لا تحتوي على نووي كاشف استخراج الحمض ، يرجى تحضير الكاشف قبل الاستخدام.

1. التعامل مع عينة

أضف 10 ميكرولتر الرقابة الداخلية في 200 ميكرولتر من التحكم الإيجابي والسيطرة السلبية ، على التوالي في أداء النواة حمض استخراج.

2. كاشف تحضير:

النظام التحضير: خذ مثبتًا مسبقًا نووي مجفد تضخيم الحمض ، متبوعًا بفتح كيس الرقائق وطرده على الفور. كمية العينة لكل اختبار يجب تكون مضاعفات الرقم 8 تحتوي على عنصر تحكم إيجابي وآخر سلبي control.add 35 ميكرولتر خالية من نوكلياز الماء على كل تفاعل أنبوب.

3. عينة تحميل:

إضافة 5 ميكرولتر عينة نووي اختبار الحمض ، والتحكم الإيجابي ، والتحكم السلبي في أن حجم التفاعل بالكامل هو 40 ميكرولتر في رد الفعل المخصص solution.for انها لا تستلزم خليطًا ناعمًا ، وأغلق غطاء PCR أنبوب رد فعل ، جهاز طرد مركزي للسائل الموجود في جدار الأنبوب الجزء السفلي من الأنبوب ، وبالتالي معالجة PCR تضخيم.

بعد التحقق ، يُقدر أن إضافة 5 ميكرولتر -10 ميكرولتر زيت البارافين في PCR لن يؤثر النظام على PCR نتيجة ولكن تجنب التلوث والتبخر السائل